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实验猴生物学特性数据测定技术规程(讨论稿-3)(4)



2008-12-19 17:10:42.0 来源:E平台实验动物资源课题组 阅读次数:3759

6.3生化数据
生化数据共包括血液和尿液2组数据,是实验动物生物学特性描述的主要数据群,也是实际中经常需要参考和使用的背景数据。本技术规程仅对实验猴生化数据的“必需数据”的测定技术进行描述。
血液生化指标一般指血清指标,对使用血浆得到的数据应注明使用的抗凝剂。
 
6.3.1样品采集
 
6.3.1.1血液样品的采集
①采血前一般要求禁食12h。
②核对动物的性别、年龄等基本信息。(注:应先测量体重、体长等数据后再行血液采集操作)
③抓取固定  见6.1.1.3 ②
④采血  见6.1.1.3 ③
⑤尽量避免血液与空气接触,并于4h内尽快检测,以保证血液测定数据的准确。
⑥用注射器采血时,应在采血后将针头取下,再将血液沿容器壁缓慢注入容器内。切勿用力过猛造成溶血。(注:有些物质如K+、AST等在红细胞内的浓度高于血浆,如溶血可引起测定数据的错误)
⑦若需要血浆,可用抗凝剂肝素,轻轻倒转容器使血液与抗凝剂混匀,切勿用力振荡。
采血后应尽快分离血清(浆)。采血后在室温下静置0.5h,然后3000r/min离心10min得到血清(浆)。
⑧血清(浆)样本放4℃保存,血常规4小时内测完,凝血功能最好2小时内测完。否则,应放-20℃~-70℃保存,一个月内测完。数据的来源最好是来自同样保存时间的同一天测的数据,无论冷冻和冷藏样本。
⑨为了保证酶活性,减少其他指标的降解,应避免反复冻融。
 
6.3.1.2尿液样品的采集
     采用穿刺法采集尿液。实验动物麻醉固定后,剪去下腹部耻骨联合之上,腹正中线两侧的被毛,消毒后用注射针头接注射器穿刺。取钝角进针,针头穿过皮肤后稍微改变角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,边缓慢进针边回抽,直到抽到尿液为止。
 
6.3.2分析仪器性能检查
无论使用手动生化测定仪还是自动生化测定仪,进行测定前按照仪器使用规程进行自检,仪器各项指标正常后方可进行测定。而且,质控标准品数值在正常范围内,测定的数值才能有效。
 
6.3.3血液生化指标(必需数据)测定
      实验猴血液生化指标15项,其中门冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、肌苷、尿素氮、总胆固醇、血清总蛋白、白蛋白、甘油三脂、血糖为必需数据,其他指标为丰富性数据。
注意 由于血糖在全血中降解速度比较快,应在采血后1h内分离血清,完成测定。
下面以全自动生化分析仪OLYMPOS AU400为例,描述必需数据的测定技术。
6.3.3.1仪器 全自动生化分析仪。
6.3.3.2试剂 生化指标检测试剂盒。
6.3.3.3 接通电源。
6.3.3.4开机。
6.3.3.5仪器自检。
6.3.3.6 选择程序确定测定指标数,门冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、肌苷、尿素氮、总胆固醇、血清总蛋白、白蛋白、甘油三脂、血糖等。
6.2.3.7将血清离心管置于样品孔内,启动检测。
具体测定方法根据生化测定仪器和所用的试剂有所不同,各实验室应采用标准测定方法,制定详细的操作规程。
 
6.3.4尿液生化指标(必需数据)测定
实验猴尿生化指标6项,其中尿比重和尿蛋白为必需数据,其他为丰富性数据。无论使用半自动还是全自动尿液分析仪,进行测定前按照仪器使用规程进行自检,仪器各项指标正常后方可进行测定。而且,质控标准品数值在正常范围内,测定的数值才能有效。尿蛋白的数据应收集24h总尿量进行测定,可表示为mg/24h。尿蛋白的定量测定方法为双缩脲终点法,以血生化分析仪测定(生化分析仪日立7020自动生化分析仪为例进行测定)。
定量测定尿比重可用尿比重计法或折射法。
具体测定方法根据生理指标测定仪器和所用的试剂有所不同,各实验室应采用标准测定方法,制定详细的操作规程。
 

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